实验二 水产品中的组胺的检测
一、 实验目的
l ．了解偶氮试剂比色法测定水产品中组胺的方法原理。 2．掌握正戊醇提取组胺的操作技术。
3．学会用偶氮试剂比色法检测水产品中组胺的检测技术。 二、实验原理
水产品中的组胺用正戊醇提取，遇偶氮试剂显橙色，与标准系列比较定量。组胺是水产品中游离的组氨酸在组氨酸脱羧酶作用下，发生脱羧反应而形成的一种胺类物质。脱羧酶来自一些含有组氨酸脱羧酶的微生物，如某些肠杆菌、弧菌属等，其中最主要的是摩根变形杆菌和组胺无色杆菌。当水产品受到这些细菌污染后，会产生大量的组胺，从而反映出水产品受微生物污染的程度。 三、仪器与试剂
(1) 正戊醇；三氯乙酸溶液(100g/L)；碳酸钠溶液(50g/L)；氢氧化钠溶液(250g/L)；盐酸(1+11)。 (2) 偶氮试剂
① 甲液：称取0.625g 对硝基苯胺，加6.25mL 盐酸溶液溶解后，再加水稀释至250mL ，置冰箱中。
② 乙液：亚硝酸钠溶液(5g/L)，临用现配。 甲液5mL 、乙液40mL 混合后立即使用。
(3) 磷酸组胺标准贮备液准确称取0.2767g 于(100士5) ℃干燥2h 的磷酸组胺，溶于水，移入100mL 容量瓶中，加水至刻度。此溶液每毫升相当于1.0mg 组胺，
(4) 磷酸组胺标准使用液 吸取5.0mL 磷酸组胺标准贮备液，置于250mL 容量瓶中，加水稀释至刻度。此溶液每毫升相当于20μg组胺。 四、实验步骤 1．样品处理
称取5.00～l0.00g 切碎样品，置于具塞锥形瓶中，加入15～20mL 三氯乙酸溶液，浸泡2～3h ，过滤。吸取2.0mL 滤液，置于分液漏斗中，加氢氧化钠溶液使呈碱性。每次加入3mL
正戊醇，振摇5min ，提取三次。合并正戊醇提取液并稀释至10.0mL 。吸取2.0mL 正戊醇提取液于分液漏斗中，每次3mL 盐酸(1+11)振摇提取三次，合并盐酸提取液并稀释至10.0mL 。备用。 2．测定
吸取2.0mL 盐酸提取液于10mL 比色管中。另吸取0、0.20mL 、0.40mL 、0.60mL 、0.80mL 、l.0mL 组胺标准使用液(相当于0、4μg、8μg、12μg、16μg、20μg组胺) ，分别置于10mL 比色管中，加水至lmL ，再各加lmL 盐酸溶液。样品与标准管各加3mL 碳酸钠溶液、3mL 偶氮试剂，加水至刻度，混匀，放置10min 后用lcm 比色杯以零管为参比，于480nm 波长处测吸光度，绘制标准曲线比较，或与标准系列目测比较。
管号
组胺标准使用液/mL
纯水/mL 盐酸溶液/mL 碳酸钠溶液/mL 偶氮试剂/mL 组胺含量/μg 吸光值（A ）
五、结果计算 (1) 计算公式
m 1 x=
m 2×(2/v1) ×(2/10) ×(2/10)×1000
式中，x 为样品中组胺的含量，mg/100g；
V 1为加入三氯乙酸溶液的体积，mL ； m 1为测定时试样中组胺的含量，μg； m 2为试样质量，g 。
(2) 结果的表述报告算术平均值精确至小数点后一位。
六、注意事项
1. 本方法的最低检出浓度为5mg/100g，允许相对误差≤10％。
0 0 1.0
1
2
3 0.60 0.40
4 0.80 0.20
5 1.0 0
样品管
2mL 提取液
0.20 0.40 0.80 0.60
标准管加1.0
样品与标准管各加3.0
样品管不加
样品与标准管都加3.0，加水至刻度，混匀，放置10min 0
4
8
12
16
20
2. 用正戊醇提取三氯乙酸溶液中的组胺时，必须用氢氧化钠溶液调pH 至碱性，以便于游离组胺的提取。
七、思考题
1. 影响组胺含量测定准确性的因素有哪些?
2. 组胺与偶氮试剂的反应中，酸碱度控制不当会给实验结果造成怎样的影响?